成果信息
效表達(dá)與純化可溶性重組人ＰＣＴ蛋白,，制備高靈敏度和高特異性的抗人ＰＣＴ醫(yī)用診斷單克隆 抗體,。方法：大腸桿菌表達(dá)重組人ＰＣＴ蛋白后,，利用飽和硫酸銨沉淀和親和層析方法純化 ＰＣＴ蛋白后，經(jīng)質(zhì)譜,、 Ｗｅ ｓ ｔ ｅ ｒ ｎｂｌ ｏ ｔ和間接 ＥＬＩ ＳＡ法進(jìn)行性質(zhì)鑒定和分析重組蛋白的表達(dá)與免疫反應(yīng)性,；重組蛋白免疫小鼠，經(jīng)細(xì)胞融 合及篩選制備抗ＰＣＴ單克隆抗體（ｍＡｂ）,，獲得７株抗ＰＣＴ單克隆抗體細(xì)胞株,，經(jīng)ＥＬＩＳＡ鑒定，篩選抗體可與 ＰＣＴ抗 原有良好的特異性反應(yīng),。結(jié)論：利用重組人ＰＣＴ蛋白免疫制備了抗人ＰＣＴ單克隆抗體,，為進(jìn)一步研發(fā) ＰＣＴ快速 診斷試劑提供了原料。 應(yīng)用前景：利用重組人ＰＣＴ蛋白免疫制備了抗人ＰＣＴ單克隆抗體,，經(jīng)過廈門大學(xué)傳染病診斷試劑與疫苗工程技術(shù)研究中心和北京熱景生物技術(shù)有限公司評估,，該抗體的特異性和親和力達(dá)到國際優(yōu)質(zhì)抗體的同類水平，可以作為 ＰＣＴ快速診斷試的原料以及進(jìn)行產(chǎn)業(yè)化,。)
背景介紹
細(xì)菌感染導(dǎo)致的抗生素濫用致細(xì)菌耐藥是我國乃至全球范圍最突出的公共衛(wèi)生問題之一,，并且由其導(dǎo)致的膿毒血癥也嚴(yán)重危害著人類健康，成為非心臟ICU死亡的主要原因,。普通的細(xì)菌感染本身并不可怕,，只要早期診斷明確并針對性治療，不會造成嚴(yán)重后果,。所以,，細(xì)菌感染的早期診斷和鑒別診斷極為重要。臨床常用傳統(tǒng)感染診斷指標(biāo)主要有外周白細(xì)胞計(jì)數(shù)(WBC),、血液中C反應(yīng)蛋白(CRP)和血液細(xì)菌培養(yǎng)等，但都存在費(fèi)時,、誤差大,、靈敏度低、特異性差等缺點(diǎn),，因此,，應(yīng)用新的標(biāo)志物來診斷細(xì)菌感染性疾病非常必要。降鈣素原(PCT)是一種有116個氨基酸殘基組成,、分子量為13kDa的糖蛋白,，血清降鈣素的前體物,。生理情況下，血中PCT濃度極低,，基本檢測不到,，但在一些細(xì)菌感染性疾病，包括細(xì)菌感染引發(fā)的全身炎癥反應(yīng),、敗血癥或膿毒性休克等患者中血清PCT水平顯著升高,，并且和疾病嚴(yán)重程度呈正相關(guān)。因此,，PCT可作為一種高靈敏的新的炎癥檢測指標(biāo),。)
應(yīng)用前景
目前PCT的主要測定方法包括定性(半定量)測定和定量測定兩種方式。主流的診斷產(chǎn)品均為國外進(jìn)口,，價格昂貴,。因此，研發(fā)具有自主知識產(chǎn)權(quán),、有較高靈敏度和特異性的PCT檢測技術(shù)和相應(yīng)產(chǎn)品,，具有重要的社會和經(jīng)濟(jì)價值。)
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