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重組蛋白質(zhì)折疊工藝技術(shù)


行業(yè)類別:醫(yī)藥生物技術(shù)與產(chǎn)品
所處階段:試生產(chǎn)階段
持有單位:中國科學(xué)院過程工程研究所
轉(zhuǎn)讓方式:技術(shù)轉(zhuǎn)讓,
轉(zhuǎn)讓價(jià)格:面議

成果信息

本項(xiàng)目建立的新型固相輔助重組蛋白質(zhì)折疊技術(shù)通過層析介質(zhì)的介入,阻隔了蛋白分子之間的相互作用,降低了聚集體的形成,。可克服傳統(tǒng)稀釋復(fù)性復(fù)性率低,,體積大等的缺點(diǎn),,不僅可在較高濃度下進(jìn)行蛋白質(zhì)的重折疊,而且復(fù)性的同時(shí)可實(shí)現(xiàn)雜蛋白以及不同折疊結(jié)構(gòu)的分離,。已建立包括凝膠過濾,、離子交換、疏水層析等多種介質(zhì)的固相輔助復(fù)性以及單梯度,、雙梯度,、三梯度等多種復(fù)性工藝。)

背景介紹

外源的重組蛋白質(zhì)在細(xì)菌中大量表達(dá)時(shí),,往往會(huì)形成不可溶,、無生物活性的蛋白質(zhì)聚集體,稱為包涵體,。由于細(xì)胞中缺乏幫助折疊的催化劑,,使得高濃度的新生蛋白質(zhì)來不及形成正確的折疊,暴露的疏水區(qū)相互作用而聚集,。目前上市的重組蛋白藥物中,,54%是以大腸桿菌作為表達(dá)系統(tǒng),而大腸桿菌中有一半形成包涵體,。和可溶形式的蛋白質(zhì)產(chǎn)物相比,,包涵體具有很多優(yōu)勢(shì),包括目標(biāo)蛋白質(zhì)純度高,,能夠抵抗蛋白質(zhì)酶的攻擊,,對(duì)宿主細(xì)胞的毒性小,易于純化以及在純化過程中不用考慮蛋白質(zhì)失活等,。許多膜蛋白在表達(dá)過程中,,因?yàn)楹茈y確定重組蛋白質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)的位置,所以形成包涵體對(duì)后續(xù)操作非常有利,。由包涵體形式存在的重組蛋白質(zhì)的后處理過程包括菌體發(fā)酵,,細(xì)胞破碎,包涵體回收,洗滌,,變性溶解,,復(fù)性以及最終產(chǎn)品的純化等步驟,其中將溶解的包涵體進(jìn)行復(fù)性是最為關(guān)鍵的一步,,復(fù)性率通常只有5%-20%,。因此,如何獲得高的復(fù)性收率一直是基因工程下游技術(shù)的研究熱點(diǎn),。)

應(yīng)用前景

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